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蛋白質組學綜合服務(iTRAQ/SILAC/DIGE/SILAC-IP/CO-IP/2-DE)

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參考報價: 面議 型號: 暫無
品牌: 暫無 產地: 暫無
關注度: 1 信息完整度:
樣本: 暫無樣本 典型用戶: 暫無

       輝駿生物自成立以來,一直致力于蛋白質組學的研究,已經幫助廣大客戶完成了蛋白質組學的研究,并成功發表了SCI論文。目前我司的主要業務包括:蛋白質組學綜合技術服務,雙向電泳,iTRAQ,SILAC,DIGE,SILAC-IP,免疫共沉淀,分子生物學,載體構建和改造服務,慢病毒包裝,穩定細胞株構建服務等

服務簡介

 iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)采用液質聯用的方法高通量地檢測多組別間的蛋白質表達差異。蛋白質酶切成多肽后,用iTRAQ同位素試劑標記多肽N末端或賴氨酸側鏈基團。標記后的多肽經過液相色譜分離,進行一級質譜和二級質譜分析,在二級質譜前,被標記的不同樣本中的同一多肽表現為相同的質荷比和其他理化性質;在二級質譜中,多肽被破碎后產生不同的信號離子,信號離子表現為不同質荷比(113119121)的峰。根據波峰的高度及面積,可以鑒定出蛋白質,并分析出同一蛋白質在不同組別中的定量信息。

技術優勢

1、 高通量,可同時對8個樣本進行分析

2、 體外標記,適用范圍廣

3、 分離能力強,定量結果可靠

4、 高靈敏度,檢測限低,可檢測出低豐度蛋白

5、 自動化程度高:液相與質譜連用,分析速度快

服務內容

1、  蛋白提取與定量

2、  iTRAQ試劑標記

3、  液相分離、質譜鑒定和定量分析

4、  數據庫檢索和蛋白質定量分析 

5、  生物信息學分析

n  成功服務案例

【研究目標】

硫酸軟骨素(CS)大量應用于骨關節炎的治療,導致CS的大量商品化,而生物體本身可以產生CS,這為CS的大量生產提供了一條途徑。大腸桿菌K4菌株能產生一種硫酸軟骨素類似物,它構成了大腸桿菌的莢膜多糖(CPS)。在酸性條件下,大腸桿菌的硫酸軟骨素類似物可以轉變為CS。據文獻報道,SlyA可以激活大腸桿菌K5莢膜基因簇的整體表達,而K4K5在莢膜基因簇的差異很微小,因此理論上SlyA也可以激活K4莢膜基因簇的表達。此實驗的主要目的是驗證SlyAK4菌株的作用。

【實驗流程】

1). 構建攜帶SlyA基因的原核載體。

2). 2份大腸桿菌K4菌株,一份轉化攜帶SlyA基因的載體,使得SlyA過表達;一份K4菌株作為   正常對照。

3). 2組菌株以相同的接種量接種到發酵罐進行發酵。

4). 通過qPCR驗證:SlyA的過表達導致了K4莢膜基因簇的過表達。

5). 通過咔唑法比較2組菌株莢膜多糖(CPS)的產量。

6). 通過iTRAQ技術找到SlyA過表達K4菌株和對照K4菌株的差異表達蛋白。

7).  對這些差異蛋白進行生物信息分析。

【實驗結果】

    處理組菌株的CPS產量是對照組的1.5-3.8倍,質譜鑒定發現處理組77種蛋白的表達量提高了、143種蛋白的表達量降低了。KEGG分析表明此菌株的糖酵解、TCA循環過程減弱,而與莢膜多糖合成有關的蛋白質表達水平出現了上升,證明SlyA基因可能通過激活與CPS合成有關的蛋白質而提高了CPS的生物產量。

【參考文獻】

Wu, Q. et al. Transcriptional engineering of Escherichia coli K4 for fructosylated chondroitin production. Biotechnology progress 29, 1140-1149 (2013).

 

 

 

 

 

 

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